上海桥星生物

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上海桥星生物提供的分子生物学试剂和试剂盒、美国联合碳化和美国光谱医学透析袋、培养基和培养耗材、细胞因子和细胞分离液、抗体和Elisa试剂盒及常用生物试剂等，Sigma、Amresco等各*大量现货火爆*，欢迎登录www.rongyilianwifi.com或、

Qiagen是世界各地研究人员*的的核酸纯化品牌之一。良好的口碑、稳定可靠的质量，每年40％的强劲增长支持Qiagen强大的科研力量专注于核酸纯化技术的不断改革和创新，使得Qiagen的产品系列广泛而全面，更成为众多小品牌模仿和学习的目标。就如IBM笔记本电脑一样，Qiagen奉行优价的政策，再加上关税运费等因素，使得Qiagen在国内市场中成为“产品”的代名词。常有实验室的人说，如果是一般实验就用国产的，如果是重要实验就用Qiagen的。诚实的说，质量和价格一向都是成正比的，所以这样一个*品牌到底在哪里还是值得我们去了解的。

    就质粒纯化领域来说，作为用户，提质粒关心的不外乎这几个因素：
1． 获得产物的纯度，因为所得质粒纯度和下游应用密切相关。
2． 产量/得率，根据个人需要获得产物的量来选择不同的纯化量。
3． 速度和使用的方便程度，稳定性。使用试剂盒无非是为了快速方便和稳定。
4． 经济性

  Qiagen的质粒纯化产品线充分照顾了4种不同纯度级别的需要（向下兼容）：
1． 转染级――这种zui高纯度的去内毒素的质粒纯化，适用于基因治疗、细胞显微注射、DNA疫苗、基因沉默(RNAi)等要求严格的操作，以及转染原代细胞、敏感细胞、悬浮细胞等对内毒素特别敏感的细胞株。
2． 常规转染级――这种纯度优于2次CsCl超速离心纯化的质粒，适用于多数细胞的转染实验、特殊的修饰反应、BAC或者cosmid建库等实验
3． 分子生物学级――这种纯度相当于1次CsCl超速离心纯化的质粒，适用于常规的建库和克隆实验、部分细胞转染、体外转录和体外翻译实验
4． 测序级――的初级纯化标准更适合于常规酶切连接反应、高通量测序、PCR、探针合成、转化等常规实验

    就纯化规模来说Qiagen的产品简单可分为Mini(20ug), Midi(100ug-200ug)，Maxi(500ug-750ug)，Mega(2.5mg)，Giga(10mg)，甚至更高的100mg大规模纯化。此外Qiagen还提供包括96孔板、8条管等高通量Mini纯化试剂盒。作为看家产品之一，Qiagen的质粒纯化产品得率是很高而且也很稳定的，一向都是质量的保证，不然也不会得到大家的一致认可。曾经某人很骄傲地告诉生物通：基本上，投诉Qiagen产品的zui终发现都是用户自己的使用问题。Qiagen对自己的产品极为自信--zui严格的质量控制，加上科研人员的一致认可，你做不出来多半是自己的问题。当然Qiagen也在不断改进说明书，甚至考虑提供中文版以减少误会的发生。

    除了质量的稳定可靠之外，Qiagen的产品设计非常人性化，不断改进以便充分满足了越来越高的要求--更快，更方便。比如需要大量纯化超纯质粒时，经过溶液1，2，3处理后需要大容量高速离心机离心沉淀。Qiafilter的推出可以经过抽滤漏斗的形式快速抽滤，避免这一次较长时间的离心，而且过滤得更干净--连偶尔出现悬浮在离心上清的细胞膜沉淀也可以*去除，令后面的纯化更有效率。另外离心或者抽滤得到的上清都需要经过Qiagen重力离子交换柱，在低盐和重力的作用下溶液流过交换树脂，复性的质粒不断被树脂吸附，杂质随溶液流出。的纯化树脂可以在不用酚氯仿等有机试剂的条件下极的纯化质粒，但是制备质粒的规模越大，溶液越多，上柱的时间也越长。zui后用高盐洗脱的质粒还需要经过异丙醇沉淀。为解决时间太长的问题，Qiagen推出了HiSpeed系列，离心或者抽滤得到的上清通过一个针管过滤器，质粒就可以地吸附在过滤器里的纯化介质上，zui后很方便的洗脱。只需要20分钟－半小时就可以完成原来需要6753个多小时的过柱工作，而且不再需要大容量高速冷冻离心机了。对于没有大离心机的实验室真是很方便的。对于一些需要做BAC，粘粒等超大质粒纯化的用户来说，基因组片断的污染和难以区分是一件烦人的事--Large Construct Kit就可以借助ATP依赖的DNA酶来消化线性的DNA而保留环状质粒，*去除基因组片断的污染。

    Qiagen的产品设计的细心和严谨可靠确实值得称道。特别是对于有特殊高要求的用户来说，Qiagen的质量是对得起这个价格的，每年两次的*活动也算不错的入货机会。我们在这里简单介绍一下Qiagen质粒纯化产品

1 转染级

    当你提取DNA是为了转染原代、敏感或者悬浮的细胞；进行基因沉默研究、细胞注射显微操作；进行基因治疗或者DNA疫苗等要求极为严格的实验，就应该考虑选择以上两种试剂盒。EndoFree系列是为了除去细菌中的内毒素而专门设计的。内毒素是革兰氏阴性菌细胞壁上*的成分，它主要成分是脂多糖中的类脂A。它在细菌被裂解时被释放出来，它的存在会极大程度地影响转染效率。同时内毒素可以激活免疫细胞的非特异反应，造成实验中的假阳性。

    EndoFree系列设计有特殊的Endotoxin removal buffer有效去除内毒素，使用此试剂盒提取的DNA内毒素含量小于0.1 EU/μg；同时引用了Qiagen*的QIAfilter的超纯过滤技术，使得到的DNA纯度相当于两次氯化铯超速离心分离纯化，而避免了常时间超离。试剂盒操作方便、快捷、结果稳定可靠；可以分别选取500ug、2.5mg、10mg的不同纯化量。当提取低拷贝质粒时建议使用meg*试剂盒而不是gig*，原因是在过滤大量的细菌培养液时QIAfilter的过滤容量有限。
当你所需DNA用量十分巨大时，比如说DNA疫苗免疫动物，可以考虑使用Qiagen公司专门为纯化核酸设计的采用了阴离子交换技术的Ultrapure 100 column。

    提取超纯DNA时无需使用常规提取中有毒的化学试剂，如苯酚、氯仿、溴化乙啶、氯化铯等，将有害物质减小到zui少，从而更好的保护实验操作人员的自身安全。

2 常规转染级 

    当你进行普通转染、构建文库、对DNA进行修饰时可以考虑以上几种试剂盒。当你用量较小时，可以考虑Plasmid Mini Kit和QIAwell 96 Ultra系列，其中QIAwell 96 Ultra系列采用8孔条或96孔板进行提取，可以利用机器人工作台进行机械提取，重复性较好。用量较大时可以选用HiSpeed Plasmid和QIAGEN Plasmid/QIAfilter/Large Construct系列。Large Construct系列是专门为了大型质粒设计的，它采用*的ATP依赖核酸内切酶有选择地消化了细菌的基因组DNA，使结果更加可靠。除了这种专门为大型DNA设计的试剂盒外，还有QIAwell 96 Ultra、HiSpeed Plasmid和QIAfilter系列也可以提取大至50kb的质粒。

    如果你有许多质粒要提取，那么可以采用QIAfilter系列以节省你的时间。此系列采用阴离子交换柱进行纯化。中性的细菌裂解液直接装入QIAfilter Cartridge中，在数秒内过滤除去杂质，将滤液装入到阴离子交换装置中，在低盐、合适的pH值下质粒被选择性的结合上去。利用中等盐浓度的洗液去除RNA、蛋白、代谢物及其它低分子量杂质。用高盐溶液将DNA洗脱，洗脱液用异丙醇沉淀，离心收集产物。

    如果你不需要很高的产率只是要求进一步提高速度，那么HiSpeed Plasmid系列将*。它的改进之处是在QIAfilter系列基础上，将过柱和离心操作改为用注射器收集产物，这样大大加快了提取的速度，将整个提取过程缩短到45或65分钟。HiSpeed Midi系列纯化载量是200ug，比原来的100ug大一倍，而HiSpeed Maxi的载量更高达750ug，比常规Maxi能纯化更多的质粒。

3.分子生物学级

    相信在大多时候，你提取质粒就是进行分子生物学操作，如体外转录/翻译，PCR，酶切等。在这个级别有两个系列以供选择。这两个系列都可以提取大至50kb的质粒。QIAprep Spin则是采用应用zui广泛的硅胶膜技术，用高盐溶液离心过柱使DNA吸附，用低盐溶液离心洗脱。得到的质粒相当于一次CsCl超速离心纯化得到的纯度，适合转染生命力较强的细胞，体外转录/翻译，长程测序，当然也包括常规的酶切，PCR等等。实际上这个纯度非常高，一些常用细胞株的转染也可以胜任；而酶切连接PCR这些实验只需要载测序级纯度的质粒就足够了，用不着这么高纯度。国产许多品牌都主战于这个范围，普通产品也能够满足一般酶切PCR等反应需要，因而个人以为这里Qiagen实在没有什么优势。生物通会在随后介绍更为经济实惠的国产篇。

    TurboFilter96孔板设计有非均匀的过滤装置，在高盐溶液下TurboFilter96孔板直接真空过滤细菌裂解液。除去大颗粒的滤液再经转染生命力较强的细胞，体外转录/翻译，长程测序过QIAprep 96孔板进行下一步的纯化。此法需时少，而且重复性好。

4.测序级

    在人类基因组项目完成后，相继有许多其它物种的基因组全序列被测出，这些都离不开测序技术的改进。以上三个系列都是为了高通量测序而设计的，它们在提取时都十分快捷、方便。DirectPrep 96 和MagAttract 96系列可以提取大至50kb的质粒，其中DirectPrep 96系列设计的裂解方式省略了清除裂解液这个步骤；而MagAttract 96系列采用的是磁珠技术，降低了试剂盒的成本。R.E.A.L. Prep 96系列采用的是快速碱裂解系统，除了一般的质粒，还可以提取cosmids, BACs, PACs, 和P1s等大型的载体。不过这个级别Qiagen没有提供手工提取的试剂盒。其实我们不就要又便宜又快的东西嘛。

    Qiagen公司质粒提取试剂盒产品可以说是十分齐全的，相信无论你有什么样的需求都可以找到一款适合自己的产品。